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柱層析硅膠的操作方法及注意事項


    利用吸附原理,即利用柱層析硅膠對中藥混合物中各種成分吸附能力的差異,使混合物中各種成分分離的色譜法。操作要點:裝柱前,柱底應墊一層脫脂棉,防止吸附劑泄漏。有兩種方法:干裝柱和濕裝柱。

柱層析硅膠

(1)干裝柱:柱層析硅膠通過漏斗裝入柱內,中間不間斷,形成細流,慢慢加入管內。也可以用橡膠錘輕輕敲打柱層析硅膠,使柱層析硅膠填充連續、均勻、緊密。柱安裝后,打開下活塞,然后倒入洗脫劑清洗柱內空氣,保持一定的液位。
(2)濕裝柱:將原洗脫劑放入柱中,打開下活塞,使洗脫劑緩慢流出。然后將柱層析硅膠慢慢連續地倒入柱中(或將柱層析硅膠與適量洗脫劑混合,慢慢加入柱中)。柱層析硅膠依靠重力和洗脫劑的驅動,在柱中自由沉降。在此期間,應不斷將流出的洗脫劑加回柱中,保持一定的液位,直至柱層析硅膠加入柱中,沉降不再改變。然后在柱層析硅膠上加入一小塊濾紙或一些脫脂棉。根據樣品量,將洗脫劑的液位控制到一定高度。
柱層析硅膠
     均勻漿法:攪拌均勻漿,加入柱層析硅膠體積翻倍的溶劑,用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮系統,則用石油醚混合;如果洗脫劑是氯仿/醇系統,則用氯仿混合。如果不能攪拌均勻漿,說明溶劑中含水量過高,尤其是乙酸乙酯/丙酮。如果色譜不與水配伍,必須提前用無水硫酸鈉長期干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥,以去除1%的醇。如果樣品對酸敏感,則不能通過氯仿系統。

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